Meja bioteknologi – transformasi, pemotongan enzim restriksi dan gel
BiologiBioteknologiUsia 17–18
Memuat…
Masuk untuk memainkanDua praktikum rekayasa genetika di satu meja virtual. Transformasikan E. coli dengan plasmid yang membawa gen resistansi ampisilin dan gen GFP yang diinduksi arabinosa (CaCl₂, es, kejut panas 42 °C, pemulihan), sebar pada cawan LB, LB/amp, dan LB/amp/ara, inkubasi secara time-lapse, hitung koloni, amati di bawah sinar UV, dan hitung efisiensi transformasi langkah demi langkah. Lalu potong DNA fag dan plasmid dengan EcoRI, BamHI, dan HindIII, muat dan jalankan gel agarosa, warnai, ukur jarak pita, buat kurva standar log(pb) dari penanda DNA, dan baca ukuran fragmen.
Pelajaran: Rekayasa genetika: transformasi bakteri, enzim restriksi, dan elektroforesis DNA pada gel agarosa
Yang ditunjukkan
Rekayasa genetika memasukkan gen ke dalam bakteri dan memeriksa DNA dengan memotongnya. Pada tab transformasi, CaCl₂ dan kejut panas 42 °C membuat E. coli mengambil plasmid berisi gen resistansi ampisilin (bla) dan gen GFP yang dinyalakan oleh arabinosa. Hanya sel yang tertransformasi tumbuh pada ampisilin, dan sel itu berpendar hijau di bawah UV hanya jika ada arabinosa. Pada tab gel, enzim restriksi memotong DNA di urutan pengenalnya; fragmen yang bermuatan negatif bergerak melalui agarosa ke elektrode positif, dan fragmen yang lebih kecil bergerak lebih jauh. Kurva standar log(ukuran) terhadap jarak dari penanda DNA memberikan ukuran fragmen yang belum diketahui.
Cara menggunakan
Di 1. Transformasi, tekan tombol langkah secara berurutan atau gunakan Lewati langkah ini untuk melewatkan es, kejut panas, atau pemulihan. Setelah Inkubasi 37 °C, atur waktu inkubasi, nyalakan Sinar UV, ketuk cawan untuk memperbesarnya, dan ketuk koloni untuk menghitungnya; perhitungan efisiensi akan terisi. Di 2. Pemotongan dan gel, pilih DNA dan enzim untuk tiap lajur, lalu Potong pada 37 °C, Muat sumur, Jalankan gel, dan Warnai dan lihat. Ketuk pita untuk mengukurnya dan baca ukurannya dari kurva standar.
Parameter yang dapat diubah
- Tab pembuka Transformasi bakteri, Pemotongan dan gel
- Konsentrasi plasmid 0,02–0,2 µg/µL
- Lama kejut panas pada 42 °C 0–120 s
- Volume yang disebar pada tiap cawan 50–250 µL
- DNA yang dipotong DNA fag linear (20.000 pb), Plasmid GFP sirkular (5.400 pb)
- Tegangan gel 50–150 V
- Lama elektroforesis 10–90 min
Pertanyaan untuk dijelajahi
- Mengapa sel tanpa plasmid membentuk hamparan pada LB tetapi tidak membentuk koloni pada LB/amp?
- Mengapa koloni berpendar di bawah UV pada LB/amp/ara tetapi tidak pada LB/amp, padahal jumlahnya mirip?
- Berapa fragmen dihasilkan tiga potongan pada DNA linear, dan berapa pada plasmid sirkular?
