Mesa de biotecnología – transformación, digestión con enzimas de restricción y gel
BiologíaBiotecnologíaEdades 17–18
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Inicia sesión para usarDos prácticas de ingeniería genética en una mesa virtual. Transforma E. coli con un plásmido que lleva un gen de resistencia a la ampicilina y un gen GFP inducible por arabinosa (CaCl₂, hielo, choque térmico a 42 °C, recuperación), siembra placas LB, LB/amp y LB/amp/ara, incúbalas en cámara rápida, cuenta colonias, obsérvalas con luz UV y calcula paso a paso la eficiencia de transformación. Después digiere ADN de fago y el plásmido con EcoRI, BamHI y HindIII, carga y corre un gel de agarosa, tíñelo, mide la distancia de las bandas, construye una curva patrón log(pb) con el marcador de ADN y lee el tamaño de los fragmentos.
Lección: Ingeniería genética: transformación bacteriana, enzimas de restricción y electroforesis de ADN en gel de agarosa
Qué muestra
La ingeniería genética introduce genes en bacterias y comprueba el ADN cortándolo. En la pestaña de transformación, el CaCl₂ y un choque térmico a 42 °C permiten que E. coli capte un plásmido con un gen de resistencia a la ampicilina (bla) y un gen GFP activado por la arabinosa. Solo las células transformadas crecen con ampicilina y brillan en verde con UV solo si hay arabinosa. En el gel, las enzimas de restricción cortan el ADN en sus secuencias de reconocimiento; los fragmentos, con carga negativa, avanzan hacia el electrodo positivo y los pequeños llegan más lejos. Una curva patrón del marcador da el tamaño de los fragmentos desconocidos.
Cómo usarla
En 1. Transformación, pulsa los botones de los pasos en orden o usa Omitir este paso para saltarte el hielo, el choque térmico o la recuperación. Tras Incubar a 37 °C, ajusta el tiempo de incubación, enciende Luz UV, toca una placa para ampliarla y toca las colonias para contarlas. En 2. Digestión y gel, elige el ADN y las enzimas de cada carril y pulsa Digerir a 37 °C, Cargar pocillos, Correr el gel y Teñir y ver. Toca las bandas para medirlas.
Parámetros que puedes cambiar
- Pestaña inicial Transformación bacteriana, Digestión y gel
- Concentración de plásmido 0,02–0,2 µg/µL
- Tiempo de choque térmico a 42 °C 0–120 s
- Volumen sembrado en cada placa 50–250 µL
- ADN que se digiere ADN de fago lineal (20.000 pb), Plásmido GFP circular (5.400 pb)
- Voltaje del gel 50–150 V
- Tiempo de electroforesis 10–90 min
Preguntas para explorar
- ¿Por qué las células sin plásmido forman un césped en LB pero ninguna colonia en LB/amp?
- ¿Por qué las colonias brillan con luz UV en LB/amp/ara pero no en LB/amp, si ambas placas tienen recuentos parecidos?
- ¿Cuántos fragmentos dan tres cortes en un ADN lineal y cuántos en un plásmido circular?
