PCR – memperbanyak DNA dengan siklus suhu
BiologiBioteknologiUsia 17–18
Gunakan di kelas Anda: siswa membukanya lewat tautan atau kode QR, tanpa perlu akun.
Berikutnya di Bioteknologi
Setiap siklus PCR terdiri atas denaturasi pada 95 °C, penempelan primer, dan pemanjangan pada 72 °C, yang menggandakan jumlah salinan segmen DNA target. Atur jumlah siklus, suhu penempelan relatif terhadap suhu leleh primer, dan jumlah salinan awal untuk melihat kurva eksponensial mendatar, pita gel makin terang, dan pita produk samping nonspesifik muncul saat suhu penempelan terlalu rendah — dasar uji PCR dan forensik DNA.
Pelajaran: Biologi molekuler
Yang ditunjukkan
Reaksi berantai polimerase menyalin satu ruas pendek DNA target. Pada setiap siklus suhu, kedua untai berpisah, dua primer menempel di ujung-ujung target, dan polimerase tahan panas menyintesis untai komplementer baru, sehingga jumlah salinan idealnya berlipat dua: N = N₀·2ⁿ setelah n siklus. Kurva kemudian mendatar ketika primer, nukleotida, dan enzim habis. Kespesifikan bergantung pada suhu penempelan dibandingkan suhu leleh primer (sekitar 60 °C di sini), dan siklus saat sinyal melewati ambang deteksi, yaitu Ct, mencerminkan jumlah awal DNA target.
Cara menggunakan
Tekan “Jalankan satu siklus ▶” untuk mengikuti denaturasi, penempelan, dan pemanjangan pada panel Program suhu. Lalu naikkan Jumlah siklus dan amati kurva jumlah salinan serta pita gel. Atur Suhu penempelan jauh di atas dan jauh di bawah 60 °C, lalu bandingkan lajur sampel. Terakhir, turunkan Jumlah salinan DNA awal (log) setahap demi setahap dan catat perubahan Ct.
Parameter yang dapat diubah
- Jumlah siklus 0–40
- Suhu penempelan 40–70 °C
- Jumlah salinan DNA awal (log) 0–6
Pertanyaan untuk dijelajahi
- Mengapa jumlah salinan tidak lagi berlipat dua setelah sekitar 30 siklus?
- Apa yang terjadi pada produk dan pita gel jika suhu penempelan jauh di atas suhu leleh primer?
- Bagaimana Ct berubah jika jumlah DNA awal turun sepuluh kali lipat, dan mengapa?
