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TP sur la réaction de Hill – DCPIP et chloroplastes isolés

BiologiePhysiologie végétale16–17 ansLaboratoire virtuel

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Broyez des feuilles dans un milieu d'isolement froid, filtrez et centrifugez pour obtenir des chloroplastes, ajoutez du DCPIP bleu et mesurez l'absorbance pendant qu'il se décolore. Réalisez des témoins à l'obscurité et sans chloroplastes, puis tracez la vitesse selon la distance de la lampe ou la température.

Leçon : Réactions dépendantes de la lumière : réaction de Hill, DCPIP accepteur d'électrons, isolement des chloroplastes, effet de l'intensité lumineuse et de la température

Ce qu’elle montre

En 1938, Robin Hill a montré que des chloroplastes isolés, à la lumière, peuvent réduire un colorant ajouté. Une déshydrogénase du chloroplaste transmet normalement au NADP les électrons des réactions dépendantes de la lumière ; ici, c'est le DCPIP qui les reçoit, bleu quand il est oxydé, incolore quand il est réduit. Vous préparez un extrait de chloroplastes, utilisez cinq tubes pour voir de quoi dépend le changement de couleur, puis mesurez la vitesse à plusieurs distances de la lampe et températures. Les tubes et le plan de lecture suivent le TP scolaire ; les vitesses, les filtres et l'effet de chaque préparation sont des estimations qui donnent le résultat habituel.

Mode d’emploi

Dans Extrait, choisissez Milieu, Conservé et Centrifugeuse, puis appuyez sur Étape suivante ou Toutes les étapes. Dans Cinq tubes, réglez Distance de la lampe et appuyez sur Démarrer : les lectures toutes les 2 minutes remplissent le tableau. Dans Vitesse, appuyez sur Mesurer pour un tube, ou Série de distances ou Série de températures, puis choisissez l'axe x avec Vitesse selon.

Paramètres modifiables

  • Expérience Extrait, Cinq tubes, Vitesse
  • Milieu de broyage Milieu d'isolement, Eau distillée
  • Conservé Sur la glace, Sur la paillasse
  • Centrifugeuse Vitesse élevée, Vitesse faible
  • Distance de la lampe 10–100 cm
  • Température 5–60 °C
  • Bécher d'eau comme écran thermique
  • Filtre du colorimètre Rouge, Vert, Bleu
  • Vitesse selon Distance, Intensité lumineuse, Température

Questions à explorer

  1. Quels tubes restent bleus, et que montre chacun sur ce dont la réaction a besoin ?
  2. Quand l'intensité lumineuse est multipliée par quatre, de 60 cm à 30 cm, la vitesse l'est-elle aussi ? Pourquoi ?
  3. Comment les vitesses à 15 cm et à 100 cm réagissent-elles à la température, et quel facteur limite chacune ?

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